蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）試劑盒說明書

                                          酶標(biāo)法100管/96樣

測(cè)定意義

  蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫(kù)”器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。

測(cè)定原理

SS催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的儀器和用品

酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、酶標(biāo)板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：1mg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存

試劑四：液體40mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存；

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

稱取約0.05g組織加入0.5mL提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

蔗糖磷酸合成酶（SPS)測(cè)試盒

測(cè)定步驟

混勻，25℃準(zhǔn)確水浴10min

沸水浴中煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分散失），冷卻

混勻，80℃水浴保溫10min，冷卻后，取200μL至酶標(biāo)板中，480nm下測(cè)定吸光值。

SS活性計(jì)算

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS活性（U/mg prot）=A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×1mg/mL÷蛋白濃度(mg/mL) ×100

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS活性（U/g鮮重）=A測(cè)定管吸光度÷A標(biāo)準(zhǔn)管×1mg/mL÷樣本鮮重(g/mL) ×100

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