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羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒多種樣本,皆可操作

更新時間:2020-08-18      瀏覽次數:1752

羥脯氨酸(HYP)含量檢測試劑盒多種樣本,皆可操作

 

羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)是亞氨基酸之一,是一種非必需氨基酸,是膠原組織的主要成分之一,且為膠原中*的氨基酸,約占膠原氨基酸總量的13%。膠原蛋白是體內含量多的蛋白質,約占人體蛋白質總量1/3。利用羥脯氨酸在膠原蛋白中含量這一特點,通過血液和尿液對羥脯氨酸的測定,可了解體內膠原蛋白分解代謝情況,即可作為結締組織分解情況指標。很多疾病可伴有膠原代謝變化而引起血、尿及組織羥脯氨酸的含量改變。目前臨床檢驗普遍使用氨基酸自動分析儀效果滿意,此外還有比色法、氣相色譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳法等。

 

產品說明:
HYP 是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此 HYP
含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。

樣品經水解產生游離的 HYP,進一步被氯胺 T 氧化,氧化產物與對二甲氨基苯甲全反應,產生
紅色化合物,在 560nm 處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液 560nm 吸光值,可計算 HYP 含量。

操作步驟:
一、羥脯氨酸提取:
1、組織:稱取約 0.2g 樣品于玻璃管,將組織盡量剪碎以便消化,蓋子稍松不密閉。加入 2mL 的提
取液,煮沸或 110℃烘箱 2 至 6 小時消化至沒有可見大的團塊,16000rpm,25℃,離心20min(若離心后仍有雜質,可通過過濾去除),用 10mol/L NaOH(約 1mL)調節 pH 值至 6~8 范圍內。蒸餾水定容至 4mL,取上清待測。(過程中可能有黑色物質生成,若長時間不能消化,可能為碳化的物質)
2. 細胞:取500萬個細胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱2至6小時消化至透明狀,16000rpm,25℃,離心 20min,用 10mol/L NaOH(約 0.5mL)調節 pH 值至 6~8 范圍內。蒸餾水定容至 2mL,取上清待測。

注意事項:
1、 OD 值大于 1.0,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、 試劑有一定的毒性,請操作時做好防護措施,防止吸入或與皮膚接觸。
3、 按樣本蛋白濃度計算時,需單獨提取樣本中的蛋白質并測定。

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