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Bradford法蛋白濃度測定試劑盒真的很棒!

更新時間:2018-01-19      瀏覽次數:1184

Bradford法蛋白濃度測定試劑盒真的很棒!

產品內容:

產品簡介:
 

考馬斯亮蘭 G-250 染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的zui大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 變
為 595nm,在一定的濃度范圍內,測定的吸光度值 A595 與蛋白質濃度成正比。Bradford 法測定蛋白濃度不受
絕大部分樣品中的化學物質的影響,樣品中巰基乙醇的濃度可高達 1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達 5mM,但受
略高濃度的去垢劑影響,需確保 SDS 的濃度低于 0.1%,Triton X-100 低于 0.1%,Tween 20, 60, 80 低于 0.06%。
含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生物試劑的 BCA 蛋白濃度測定試劑盒。

Bradford法蛋白濃度測定試劑盒真的很棒!

操作說明:
 

一.微孔酶標儀法
1. *溶解蛋白標準品,取 10ul,稀釋至 250ul ,使終濃度為 0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中,
標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋標準品。
2. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻,取 1ml 5×G250 染色液,加入 4ml 雙蒸水,混勻成 1×G250
染色液,此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。
3. 將標準品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分別加到 96 孔板中,加 PBS 稀釋液補足到 20 微升。
4. 將樣品作適當稀釋(多做幾個梯度,如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋),加 20 微升到 96 孔板的樣品孔
中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。
5. 各孔加入 200 微升稀釋后的 1×G250 染色液,室溫放置 3-5 分鐘。
6. 用酶標儀測定 A595,或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。
7. 根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。

 

二.分光光度計法
 

如無酶標儀,染色反應可在離心管中進行,反應液混勻后加入比色皿中,使用分光光度計測定吸光值。
 

步驟如下:

1. 取八支(或者更多)干凈的 10ml 離心管,標記上號。

2. 取 100ulBSA 加入 PBS 2.4ml 稀釋至終濃度為 0.2mg/ml。

3. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻,取 10ml 5×G250 染色液,加入 40ml 雙蒸水,混勻成 1× G250 染色液,此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

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